暗纹东方鲀线粒体ND1及其侧翼tRNA基因的克隆及序列分析

利用提取纯化的暗纹东方纯（rakifugu fasciatoz）肝脏的mtDNA为模板，按红鳍东方纯（rakifugu rubripes）mtDNA序列设计合成特异引物进行PCR扩增，首次克隆并测定了暗纹东方纯mtDNA的ND1亚基及其侧翼的tRNA基因。运用DNA分析软件，对暗纹东方纯与GenBank中选取的几种同目的鱼类的相应序列进行比较分析，显示暗纹东方纯与这些鱼类的各个相应基因具有较高的同源性。利用分子生物学相关软件，对暗纹东方纯及与其同目的6种鱼的ND1基因序列建立NJ和MP分子进化树，并与传统的分类地位进行比较，结果表明与传统的分类地位基本吻合。3个tRNA基因含有69～71个碱基，推定了各个tRNA的二级结构，均具有较为典型的三叶草型结构。     

甲醛、痢特灵对暗纹东方鲀水花的联合急性毒性

采用急性毒性试验的常规方法-死亡概率法,以甲醛、痢特灵2种药物为供试毒物,研究了它们对暗纹东方鲀水花的单一及联合急性毒性。结果表明:甲醛、痢特灵对暗纹东方鲀水花96 h的LC50分别为76.70 mg/L和12.95 mg/L,安全浓度分别为7.67 mg/L和1.295 mg/L;甲醛、痢特灵对暗纹东方鲀水花24 h、48 h和96 h的联合急性毒性试验,结果其相加指数分别为-0.800、-0.577和0.845,表明甲醛和痢特灵对暗纹东方鲀水花的联合急性毒性在24 h、48 h表现为拮抗效应、而在96 h表现为协同效应。     

南麂列岛红鳍东方鲀网箱养殖试验

1996年7月～1996年12月在南麂列岛进行了红鳍东方网箱养殖试验。结果表明:切齿与否是养殖成活率最主要的影响因素。经2年试验,摸索了红鳍东方TakifuguRubripes养殖从苗种运输、暂养驯化、养成技术、病害防治一整套工艺规范,在自残机理与切齿时间方面有新的见解,并在该鱼养殖中首次在肝脏表面发现明沟线虫ContracaecumRailleetHenry(1912)。     

Investigations into the perplexing interrelationship of the Genus Takifugu Abe, 1949 (Tetraodontiformes, Tetraodontidae)

The phylogenetic relationships within the genus Takifugu Abe, 1949 (Tetraodontiformes, Tetraodonti- dae) remain unresolved. Because of the use of Takifugu as model organisms, the resolution of these relationships is crucial for the interpretation of evolutionary trends in biology. Pufferfishes of this ge- nus are comprised of a comparatively small number of species and are mainly distributed along the coastal region of the western part of the Sea of Japan and the coastline of China. Mitochondrial gene sequences were employed to test the phylogenetic hypotheses within the genus. Seventeen species of the genus were examined. Molecular phylogenetic trees were constructed using the maximum parsi- mony, neighbor-joining, maximum likelihood and Bayesian methods. Our hypothesis of internal relationships within the genus differs from previous hypotheses. Our results indicate that (1) the genus Takifugu is a monophyletic assemblage; (2) the genus is divided into 6 subgroups based on the mo- lecular data; and (3) there is low genetic diversity among the species within this genus. In addition, speciation within Takifugu appears to be driven by hybridization and isolation by distribution. Our re- sults also suggested that the taxonomy in the genus should be clarified based on both molecular and morphological data.     

暗纹东方鲀线粒体若干tRNA基因的克隆及序列分析

利用分离纯化的暗纹东方鲀肝脏mtDNA为模板，按照红鳍东方纯（Takifugu rubripes）mtDNA序列设计合成特异引物进行PCR扩增，首次克隆并测定了暗纹东方纯mtDNA的Cytb、COⅠ、COⅡ、COⅢ、D-loop等5个重要基因及其侧翼的8个tRNA基因。上述基因均已在GenBank登录。8个tRNA基因含有69-72个碱基。推定了各个tRNA的二级结构并进行了初步的序列分析。结果表明：8个tRNA基因具有较为典型的三叶草型结构，各臂的碱基配对率大多数较高，稳定性较好.     

菊黄东方鲀卵黄蛋白原肽段vWD的真核重组表达及功能研究

河鲀的卵黄蛋白原可能参与河豚毒素（TTX）的体内转运过程。为了探讨该机理,建立了毕赤酵母真核表达系统,成功地表达了菊黄东方鲀（Takifugu flavidus）卵黄蛋白原的vWD结构域肽段（rTF_vWD）,并采用Biacore-表面等离子体共振（SPR）系统检测了rTF_vWD与TTX的亲和力,以及腹腔注射小鼠验证rTF_vWD对TTX毒力的中和作用。结果表明:rTF_vWD与TTX的平衡解离常数（KD）为3.1 mmol/L;将TTX与rTF_vWD共孵后肌肉注射小鼠,2 h内小鼠的死亡率显著下降,表明TTX与rTF_vWD结合后,TTX的毒性降低了。     

对虾、东方鲀和星虫混养模式的氮磷收支研究

以凡纳滨对虾和菊黄东方鲀的封闭式混养系统为对照组,在对照组的混养基础上移植可口革囊星虫,并以该混养系统为实验组,研究星虫对鱼虾混养系统氮、磷收支的影响.结果表明:凡纳滨对虾的体重增长率,实验组高于对照组,但差异不显著;动物体氮、磷累积量,实验组显著高于对照组;底质中氮、磷累积量,实验组低于对照组.可见,鱼虾混养系统中移植可口革囊星虫可以增加养殖产量,提高饲料氮、磷的利用率,减少氮、磷元素对底质的污染     

暗纹东方纯CD8α基因克隆、原核表达与多克隆抗体制备

CD8是与Ⅰ型主要组织相容性复合体（MHCI）结合，是T细胞表面受体（TCR）的共受体．也是T淋巴细胞表面的重要标志物。该研究报道了暗纹东方纯胸腺等组织中克隆获得CD8αcDNA序列及其相应的基因组序列。克隆到的cDNA序列全长1061bp，包含1个657bp的开放读码框（ORF），编码218个氨基酸；其对应的基因组序列为1533bp，包含5个内含子和6个外显子。生物信息学分析表明，D8d蛋白质序列由信号肽、胞外可变区、铰链区、跨膜区和胞内区5部分组成。胞外区的可变区和铰链区部分各有两个高度保守的半胱氨酸残基，可能参与链内和链间二硫键的形成。氨基酸序列多重比对表明，暗纹东方鲍与其他鱼类的CD80α，特别是与鲽形目鱼类具有较高的同源性。为进一步研究暗纹东方纯CD8的生物学功能，构建了表达CD8α成熟肽胞外区的重组质粒，诱导表达出重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫大白兔，制备了抗血清。经间接ELISA法检测抗体效价表明。获得了高效价的特异性暗纹东方纯CD8c~抗体，为进一步研究CD8在鱼类淋巴细胞进化和适应性免疫中的作用奠定了基础。     

沼泽红假单胞菌在暗纹东方鲀育苗上的应用

报导了沼泽红假单胞菌在暗纹东方育苗中应用的初步研究 .试验过程中按水体 5 0 μg/L的浓度向试验池投放沼泽红假单胞菌 ,研究该菌对育苗池水质、仔鱼育成率以及生长情况的影响 .结果表明 :5 0 μg/L的沼泽红假单胞菌可以有效去除育苗池水的COD(化学需氧量 )、N NH+ 4(氨氮 )以及N NO- 2 (亚硝氮 ) ,从而显著改善育苗池水质 ,稳定水体DO(溶氧 ) ;同时 ,暗纹东方仔鱼育成率以及生长都有了显著的提高     

暗纹东方鲀线粒体ATPase8和ATPase6基因的克隆与序列分析

克隆并测定了暗纹东方鲍（Takifugu fasciatus）线粒体ATP合酶Fo亚基8（ATPase8）和亚基6（ATPase6）的序列,并对其进行了初步分析。结果表明：PCR扩增产物的总长度为923bp,其中842bp为ATP8和ATP6基因的编码区。ATP8基因长168bp,编码55个氨基酸残基的蛋白质,其蛋白分子质量为6．8KD,等电点为7．85;ATP6基因长684bp,编码227个氨基酸残基的蛋白质,其蛋白分子质量为24．9KD,等电点为9．16。暗纹东方纯ATP合酶Fo亚基8和亚基6与其他已报道的部分东方纯属鱼类具有很高的同源性。通过探讨ATP合酶F0亚基所含的信息量,发现相对于其他线粒体基因,ATPase8和ATPase6基因所含鉴别信息较少。